ELISA技巧學習很重要

    ELISA試劑盒實驗經(jīng)驗是需要操作者們自身積累的，但是掌握了實驗技巧之后可對實驗的學習與操作事半功倍。ELISA技巧學習很重要！下面一起來看看上海恒遠生物公司今天給大家?guī)砹四男嶒灱记蓛?nèi)容：

    抗原抗體反應要求在適比例條件下進行，ELISA反應試劑多，其工作濃度不同對結果影響較大，因此必須對包被抗原(抗體)和酶標抗體(抗原)進行*工作濃度的滴定和選擇，以達到zui佳的測定條件。

    (一)方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度：
    用包被液將抗原作一系列稀釋(1:50～l:800)后，按行進行包被、洗滌。按列分別加入用稀釋液1:100稀釋的強陽性、弱陽性、陰性參考血清及稀釋液(作空白對照)，保溫，洗滌。加工作濃度酶標抗體，洗滌，加底物顯色，加酸終止反應后讀取A值。選擇強陽性參考血清A值；為0．8左右，陰性參考血清A值<0．1的包被抗原稀釋度為工作濃度。

    (二)方陣(棋盤)法選擇包被抗體和酶標抗體的工作濃度：
    將抗體用包被液稀釋為10mg/L、lmg/L、0.1mg/L三個濃度按行包被，每一個濃度包被三行(每行3孔)，分別在每個濃度包被的、二、三行中分別加入強陽性抗原，弱陽性抗原和陰性對照，將酶標抗抗體用稀釋液稀釋為1:l 000、l:5000、l:10000三個濃度，分別加入每個濃度包被的、二、三列中。加底物顯色，加酸終止反應，分別讀取A值。以強陽性抗原液A值在0.8左右，陰性參考A值<0.1的條件為適條件。據(jù)此選擇包被抗體和酶標抗體的zui佳工作濃度。
       
    抗體的稀釋度包括特異性抗體，中間抗體及標記抗體。任何一種免疫組化方法要想得到令人滿意的染色效果，必須將抗體進行zui佳稀釋。一般來說，抗體的稀釋度取決于下列因素。 
    1.抗體的濃度(亦稱滴度)
    每毫升溶液內(nèi)所含抗體分子越多，滴度就越高，該抗體可高度稀釋，尤其是特異性一抗的稀釋度。一般商品化抗體只知道每毫升含多少抗體蛋白量，不知道所含抗體分子。自己制備抗體可通過瓊脂糖雙擴散或放射免疫法進行測定。商品化抗體一般告知大約的稀釋度，例如用PAP法可1：100～1：200稀釋。但往往購買到一種新抗體后，需要利用組織切片進行zui佳稀釋度的測定。  
    2.抗體的配制
    抗體的配制及使用是開展免疫組織化學工作的一個重要環(huán)節(jié)，其檢測的結果既要可靠，又要能重復，這就要求實驗人員在配制抗體過程中要注意其度。目前，隨著抗體稀釋液的穩(wěn)定性提高，一次稀釋抗體可用一年。當然，還可以購買到商品化即用型一抗，使用非常方便。 
    3.抗體稀釋液的種類
    可根據(jù)需要選擇不同的抗體稀釋液。如稀釋當天用完的一抗，用0.05m01/L(pH7.6)TBS即可。如需長期保存，可用如下稀釋液：取0.1g明膠(或綠色明膠)溶在100ml0.05m01/L(pH7.6)TBS緩沖液中，邊攪拌邊加熱至60℃，待*溶解后，冷卻至室溫，加入1g牛血清白蛋白，后加入200mg aN3，分裝保存在一40℃中備用。另外，抗體原液應分裝后一40℃保存，可保存5年以上。
       
    ELISA試劑盒應保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。上海恒遠生物公司提醒您：從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。咨詢采購高品質進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒，歡迎您致電聯(lián)系我公司業(yè)務員。