小鼠骨髓的染色體制備方法步驟

    染色體制備方法步驟

    （1）秋水仙素處理：取骨髓前3h先給小鼠腹腔注入秋水仙素，注射劑量為100μg／kg動物體重。

    （2）取骨髓：用損傷脊髓法處死小鼠，然后用剪刀剪開大腿上的皮膚和肌肉，取出大腿骨，用一小塊紗布搓干凈附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，然后用注射器吸取5ml 0.85％生理鹽水，插入股骨一端，將骨髓細胞沖洗至10ml的離心管中。可重復(fù)沖洗多次，直至骨髓腔呈白色為止。

    （3）低滲處理：將所獲得的細胞懸浮液以 1000rpm離心10min，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075mol/L KCL 溶液（37℃）至8ml刻度，將細胞沉淀物吹散打勻，在37℃水浴低滲25min。

    （4）固定：低滲處理后，立即加入1ml新配制且預(yù)冷的固定液，抽打均勻，然后1000 rpm離心10min，棄上清。沿管壁加固定液至6ml， 吹散細胞后靜止固定10min，即*次固定。按上述條件離心，去上清液，再次加入固定液至6ml，進行第二次固定。10min后離心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，再往沉淀物中滴加4滴固定液，沖勻制成細胞懸液。

    （5）滴片：取事先在冰箱中預(yù)冷的載玻片，從約15cm高處向每個載玻片上滴1～2滴細胞懸液于粘有冰水的載玻片上，晾干。

    （6）染色：取制片平放在玻璃板上，用1∶9 Giemsa染液染色20min，流水沖洗后晾干。

    （7）觀察：小白鼠染色體的形態(tài)特征，并計算2n的染色體數(shù)目。

    實驗原理 小鼠骨髓細胞有高度的分裂活性，并且數(shù)量非常多，因此不必進行體外培養(yǎng)，可直接觀察到分裂期細胞。處于分裂期的細胞經(jīng)秋水仙素處理，阻斷紡錘絲的形成，使細胞分裂停止于中期，此時染色體達到zui大收縮，具有典型的形態(tài)。低滲處理使細胞破裂，便于染色體分散。該方法在臨床上多用于白血病的研究，也可用于觀察毒性物質(zhì)對機體遺傳物質(zhì)——染色體損傷的狀況。