技術(shù)分享:ELISA加樣步驟的常見(jiàn)問(wèn)題及對(duì)應(yīng)方法

        ELISA實(shí)驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。選擇試劑時(shí)，應(yīng)選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

ELISA加樣步驟的常見(jiàn)問(wèn)題：
    ①：過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))；
    ②：手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間；
    ③：加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。
 

對(duì)應(yīng)解決方法：
    ①：標(biāo)本為血清，將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
    ②：加樣后及時(shí)放入孵箱。
    ③：加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
    ④：如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
    ⑤：標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
               
        ELISA試劑盒在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量。現(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。