ELISA試劑盒實驗是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。看似簡單的Elisa試劑盒操作實驗中，有著一些關(guān)鍵重點需要大家了解及掌握。在今天的文章內(nèi)容，上海恒遠生物的技術(shù)人員為您講解實驗重點：
一、檢測試劑要適量
切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。如果您的ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景，那么也無需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的問題。悉心優(yōu)化，相信很快就會有漂亮的結(jié)果。
二、洗滌很重要
如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
三、關(guān)鍵的封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20(上海恒遠生物公司的Tween-20 吐溫-20 新貨已經(jīng)上市啦，需要的咨詢哦！)。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度，它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。
四、抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
以上內(nèi)容就是恒遠技術(shù)人員為您總結(jié)的ELISA試劑盒實驗的重點，希望能夠給您的實驗帶來幫助。如有疑問，歡迎廣大用戶咨詢，我們將本著 “專注品質(zhì)、信守承諾、積極溝通、創(chuàng)新服務(wù)”的精神，熱誠為每一位客戶提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)！
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