新型技術(shù)研究酶循環(huán)法

ELISA新方法酶循環(huán)法

此法是Serf于1985年建立。在反應(yīng)系統(tǒng)中，AP并不直接催化底物顯色，而是使底物NADP+（輔酶Ⅱ）脫磷酸，NAD+（輔酶1）。NAD+活化第二酶系統(tǒng)——醇脫氫酶和黃遞酶（diaphoras）催化的氧化還原循環(huán)（redoxcy cycle），NAD+還原為NADH，乙醇被氧化成乙醛。

NADH還原四氮唑鹽深藍(lán)色的可溶性甲譖（入max二492nm）。此反應(yīng)系統(tǒng)具有較強(qiáng)的放大效應(yīng)，對(duì)AP信號(hào)的放大比一般KLISA至少?gòu)?qiáng)250倍。

Johannsson等將上述反應(yīng)系統(tǒng)引入雙抗體夾心ELISA法，用于檢測(cè)促甲狀腺激素（TSH），敏感性可達(dá)pU／L，即每孔（100rtl）約2．8X104個(gè)TSH分子。

據(jù)Seth等研究認(rèn)為，此種新型ELISA在敏感性、特異性、測(cè)定速度及簡(jiǎn)便程度等諸方面均優(yōu)于放射免疫測(cè)定。反應(yīng)的zui終產(chǎn)物甲臘的zui大吸收波長(zhǎng)（492nm）又在現(xiàn)有酶標(biāo)儀的讀數(shù)范圍，檢測(cè)時(shí)無(wú)需增添新設(shè)備。

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