鄰苯二醛組胺熒光法的操作程序及注意事項解析

鄰苯二醛組胺熒光法的操作程序及注意事項解析 
      1．操作程序
    （1）標本制備：新鮮組織冰凍切片或鋪片，風干后移至含P2O5的干燥器中繼續(xù)于燥4小時；固定的組織標本石蠟切片，脫蠟后風干；
    （2）鄰苯二醛處理：將40mg結(jié)晶鄰苯二醛加入已預(yù)熱至100℃的立式染色缸內(nèi)，蓋好，約15分鐘后，取出染色缸，立即將干燥好的組織切片或鋪片移人染色缸內(nèi)2—3分鐘；也可在室溫下將1％鄰苯二醛的乙基苯液直接滴加在切片或鋪片上反應(yīng)4分鐘；
    （3）濕化：將標本移至濕盒內(nèi)（但勿與水直接接觸）2～4分鐘；
    （4）80℃烘箱中作用5分鐘；
    （5）封片、熒光顯微鏡觀察分析同前；
    （6）結(jié)果：含組胺較高的細胞呈黃色熒光；組胺含量較少的細胞呈藍色熒光。

    2 ．原理  在一定溫度和濕度下，組織細胞內(nèi)的組胺與鄰苯二醛（OPT）發(fā)生聚合反應(yīng)。形成的聚合產(chǎn)物發(fā)出兩種熒光，一是組胺含量高時，呈黃色熒光，比較穩(wěn)定，zui大激發(fā)波長為405nm；二是組胺含量低時。呈藍色熒光。不穩(wěn)定，褪色較快。zui大激發(fā)波長為365nm。
    3．注意事項    
    （1）組胺含量低時，與鄰苯二醛縮合反應(yīng)的熒光團不穩(wěn)定，熒光易淬滅，需盡快觀察記錄；
    （2）鄰苯二醛與胰高血糖素等一些多肽的氨基末端組氨酸反應(yīng)亦可形成較強熒光產(chǎn)物；
    （3）濕化處理較為關(guān)鍵，需嚴格控制；
    （4）對照實驗：省略鄰苯二醛液處理步驟，結(jié)果應(yīng)為陰性。

組胺（HA）是一種血管活性物質(zhì)和致痛物質(zhì)，存在于外周肥大細胞、嗜堿性粒細胞以及  胃黏膜一些內(nèi)分泌細胞的顆粒中，也存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一些神經(jīng)元突觸小泡內(nèi)。

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