在綿綿春雨的伴隨之下，四月已將近過半。在這個月中，您都有哪些收獲呢？上海恒遠(yuǎn)公司結(jié)識了幾位客戶，并為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院李老師、山西醫(yī)科大學(xué)俞老師等客戶解決實驗技術(shù)問題。今天上午，我公司歐陽博士對四月技術(shù)做出總結(jié)，與大家交流ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。
一、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法
①ELISA實驗中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計算每個濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。
②平均OD值減去空白孔的OD值。
③制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等）并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實際濃度很接近（+/-10%）。選擇擬合度zui高的那條曲線。
二、測定多個酶標(biāo)板時是否可以使用同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線？
在測定不同板中的樣品時，每一個板都對應(yīng)一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。技術(shù)錯誤或者不同的孵育情況，環(huán)境條件都會引起酶標(biāo)板之間產(chǎn)生不同結(jié)果。一條標(biāo)準(zhǔn)曲線測定的樣品值必需是在相同環(huán)境下產(chǎn)生的，否則就是無效值。
三、溫馨提示
如果樣品的OD值超過標(biāo)準(zhǔn)曲線的zui高值，在實驗前應(yīng)該先將樣品稀釋從而得到準(zhǔn)確的濃度。樣品的zui終度應(yīng)該是計算出的濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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