技術(shù)服務(wù)：相對(duì)定量SYBR Green I 染料法

                                                    相對(duì)定量SYBR Green I 染料法

　　熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。康為世紀(jì)提供利用熒光定量PCR的方法對(duì)樣品中的基因表達(dá)情況進(jìn)行相對(duì)定量或定量分析的技術(shù)服務(wù)。
 

服務(wù)價(jià)格

服務(wù)內(nèi)容
　　相對(duì)定量 （mRNA表達(dá)量分析）
　　基因表達(dá)的研究一般采用相對(duì)定量的方法。相對(duì)定量法必須對(duì)樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時(shí)分別進(jìn)行定量，然后求出對(duì)于內(nèi)參基因的目的基因的相對(duì)量。通過(guò)對(duì)樣品間的目的基因的相對(duì)量進(jìn)行比較，可以對(duì)不同樣品間的mRNA進(jìn)行表達(dá)量分析。內(nèi)參基因通常選用表達(dá)量相對(duì)恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過(guò)同時(shí)對(duì)內(nèi)參基因的實(shí)時(shí)檢測(cè)，可以對(duì)樣品之間由于起始細(xì)胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進(jìn)行校正，達(dá)到在嚴(yán)格意義上對(duì)樣品之間的mRNA表達(dá)量進(jìn)行分析之目的。

　　定量　　
　　定量首先必須構(gòu)建與檢測(cè)樣品目的基因具有相同序列的標(biāo)準(zhǔn)品，本公司服務(wù)內(nèi)容為采用TA克隆的方法構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品。使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品制作5個(gè)點(diǎn)以上的標(biāo)準(zhǔn)曲線后，可以使用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知濃度的檢測(cè)樣品進(jìn)行量 （起始拷貝數(shù)）分析。

　　SYBR Green I 染料法
　　SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，SYBR Green I只與雙鏈DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，熒光信號(hào)與雙鏈DNA分子數(shù)成正比，隨著擴(kuò)增產(chǎn)物增加而增加，熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了反應(yīng)體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。以SYBR Green I作為檢測(cè)信號(hào)的熒光定量PCR方法稱(chēng)為染料法。

　　TaqMan探針?lè)?/strong>
　　PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來(lái)的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。以Taqman探針作為檢測(cè)信號(hào)的熒光定量PCR方法稱(chēng)為探針?lè)ā?br />
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
　　·先進(jìn)的儀器，的試劑，專(zhuān)業(yè)的團(tuán)隊(duì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
　　·免費(fèi)設(shè)計(jì)優(yōu)化引物，使定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增效率達(dá)到90%以上，使相對(duì)定量結(jié)果更可靠。

樣品要求
　　客戶(hù)需提供組織、細(xì)胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：

終產(chǎn)品
　　·一對(duì)引物（上游引物和下游引物）及其序列；
　　·完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告；
　　·
服務(wù)說(shuō)明
　　·客戶(hù)提供基因序列。
　　·如因?qū)嶒?yàn)材料等非本公司原因造成某實(shí)驗(yàn)步驟失敗，使實(shí)驗(yàn)提前終止，已啟動(dòng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目仍正常收費(fèi)。

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域的解決方案提供商，全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈，致力于提供全方面的解決方案。目前建立了一系列技術(shù)服務(wù)平臺(tái)。我們致力于每位客戶(hù)的滿(mǎn)意和成功，為客戶(hù)提供zui有競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品和解決方案，持續(xù)為客戶(hù)創(chuàng)造zui大價(jià)值。