胎牛血清,胎牛血清熱滅活

 一、“胎牛血清,胎牛血清熱滅活”概述：

   采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成。本產(chǎn)品無支原體、無牛病毒、無噬毒體、內(nèi)毒素含量低于1EU/ml，適用于細(xì)胞、組織器官培養(yǎng)、細(xì)胞株保藏、單抗研制，是醫(yī)院、科研院校、動(dòng)物疫苗、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一。


二、“胎牛血清,胎牛血清熱滅活”使用前處理及儲存條件：

使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補(bǔ)體成分，避免補(bǔ)體對細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。血清經(jīng)過滅活也會(huì)損失一些對細(xì)胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經(jīng)滅活直接用于培養(yǎng)，這樣做的前提是確認(rèn)血清中不含補(bǔ)體成分。對于一些品質(zhì)高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經(jīng)滅活直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時(shí)現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時(shí)間存放，應(yīng)盡快使用。

 三、操作問題：
如何避免沉淀物的產(chǎn)生?
1、解凍血清時(shí)，請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2、解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56。C，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
四、“”常見問題處理：
1.血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。  
2.解凍血清先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。        
3.血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過濾膜。 
4.加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。 
5.做熱滅活有必要嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量! 
6.細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)： 
（1）細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸 
（2）血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果 
（3）配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長 
（4）配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn) 
（5）培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除