小鼠白細胞介素12（IL-12）ELISA試劑盒代測

操作過程中可能出現的問題和解決方法

問題

可能原因

解決方法

顯色淡，靈敏度偏低

1、試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高

盡量縮短運輸時間，夏季應放冰塊降溫

2、試劑盒未充分平衡

試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。

3、培養箱溫度不足37℃

注意培養箱溫度，放入反應板后盡量減少開啟次數以免影響溫度恒定，非隔水式培養箱尤其應注意

4、保溫時間不足

校正定時鐘準確定時

5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加

按說明書要求保留洗滌時間，準確記住洗滌次數

6、移液器吸液量不足，吸嘴內壁掛水太多或內壁不清潔

校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內壁要清潔，一次性使用

7、蒸餾水水質有問題

使用新鮮合格的蒸餾水

8、底物作用時間不足

準確定時

背景深，全部呈有色

1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留

濃縮洗液準確配制；10倍濃縮洗滌液如有結晶則應讓結晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用，不要反復使用，否則易造成污染

2、樣品污染

樣品應新鮮采集，或低溫保存，防止污染

3、培養箱溫度超過37℃或反應時間過長

調整培養箱溫度，準確定時

4、吸嘴重復使用，未洗凈或消毒不*

吸嘴盡可能一次性使用

5、蒸餾水被污染

使用新鮮蒸餾水

6、酶等試劑混用

不同批號試劑勿混用

7、一次實驗的標本量過多，加樣時間太長，導致實際反應時間延長

合理安排實驗，避免幾塊酶標板同時加樣

重復性不佳

1、樣品數量多少不一，加樣時間有長有短

重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近

2、保溫時間不*，洗滌條件不*，操作人員不*

重復測定標本，操作條件、人員等應盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性

3、加樣量不*

樣品稀釋前應充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

出現白板,陽性對照不顯色

顯色液變質

更換新的顯色液

洗滌液配制有誤

請按說明書所示稀釋倍數配制

未加酶結合物而認為已加入

注意不要漏加

終止液誤作洗滌液稀釋或當底物液使用

每次加液前均應看清標簽