小鼠白細(xì)胞介素2（IL-2）ELISA試劑盒原理

操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法

問題

可能原因

解決方法

顯色淡，靈敏度偏低

1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高

盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

2、試劑盒未充分平衡

試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。

3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃

注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意

4、保溫時(shí)間不足

校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)

5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加

按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)

6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔

校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用

7、蒸餾水水質(zhì)有問題

使用新鮮合格的蒸餾水

8、底物作用時(shí)間不足

準(zhǔn)確定時(shí)

背景深，全部呈有色

1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留

濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，*拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染

2、樣品污染

樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染

3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)

調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)

4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*

吸嘴盡可能一次性使用

5、蒸餾水被污染

使用新鮮蒸餾水

6、酶等試劑混用

不同批號(hào)試劑勿混用

7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過多，加樣時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)

合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣

重復(fù)性不佳

1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短

重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近

2、保溫時(shí)間不*，洗滌條件不*，操作人員不*

重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持*，以排除這些因素造成的不*的可能性

3、加樣量不*

樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

出現(xiàn)白板,陽性對(duì)照不顯色

顯色液變質(zhì)

更換新的顯色液

洗滌液配制有誤

請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制

未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入

注意不要漏加

終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?/span>

每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽