大鼠內(nèi)毒素（ET）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠內(nèi)毒素（ET）的含量。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠內(nèi)毒素（ET）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠內(nèi)毒素（ET）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作問題：

試劑準(zhǔn)備不當(dāng)可能影響酶聯(lián)免疫吸附測定ELISA結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)室，對試劑準(zhǔn)備一般不太注意，通常的做法是，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。

    因此，在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是，在實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí)，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。

大鼠內(nèi)毒素（ET）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)樣品要求

　·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。

　·檢測的樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。

　·樣本收集后應(yīng)立即-20℃保存，若長期保存應(yīng)-70℃。

　·樣本量的要求：若一個(gè)指標(biāo)做復(fù)孔檢測應(yīng)不少于250ul，做單孔檢測應(yīng)不少于120ul。建議若客戶樣本量充足提供500ul以上。

  ·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復(fù)凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運(yùn)輸。郵寄前請與溝通確認(rèn)。

大鼠內(nèi)毒素（ET）ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)的回收率

    elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定,樣品水中含有無機(jī)氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,測定時(shí)忽略體積變化,如果測定出樣品中無機(jī)氯為2.98mg/L,則認(rèn)為回收率為98%。

對于定量檢測來說，主要還是一個(gè)準(zhǔn)確度的驗(yàn)證。不過我看到別人寫的內(nèi)容比我自己想說的要好，所以就貼上去了。相對回收率可能會(huì)高于100%的，如果只是說“損失程度”，其實(shí)是不準(zhǔn)確的。應(yīng)該說，回收率越接近100%，說明這個(gè)試劑盒的準(zhǔn)確度越高。

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