總抗氧化能力(T-AOC）試劑盒 (ABTS法)

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

研究意義：

測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

總抗氧化能力(T-AOC）試劑盒 (ABTS法)測定原理：

ABTS 法是使用zui廣泛的間接檢測方法，可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定。ABTS 經(jīng)氧化后穩(wěn)定的藍綠色陽離子自由基 ABTS⁺，能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中，在 734nm處有最大吸收。被測物質(zhì)加入 ABTS⁺溶液后，所含抗氧化成分能與 ABTS⁺發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色。在 734nm 檢測吸光度的變化，并以 Trolox 作為對照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋、低溫離心機、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 120mL×1  瓶，4℃保存。

試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

操作步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 734nm。

2、 工作液的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入 11mL 試劑一，震蕩混勻 20min 后，靜置， 取上清使用。（注意，現(xiàn)配現(xiàn)用）

3、操作表（在 EP 管中反應(yīng)）

注意：空白管只需測定一次，吸取工作液時不要吸到底部沉淀，若A 測定小于 0.4，需用提取液稀釋后檢測。