大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒供應商

酶聯(lián)免疫吸附試驗法是以固相載體吸附技術(shù)和免疫酶技術(shù)相結(jié)合建立的一種檢測方法大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒操作簡便，無需特殊設備，并具有高度的敏感性和準確性，所以受到大家的廣泛重視，以致在較短時間內(nèi)，于國內(nèi)外均取得了較快的進展。
ELISA的特點 靈敏度高，檢測能力可達10-6mg/ml水平；應用范圍廣，既能檢測抗原又能檢測抗體，既能定性又能定量；有效期長，酶標抗體于普通冰箱中可保存一年以上，效價不下降，制成的標本，可長久保存，供隨時復查用。
［附］：免疫酶染色法（組化法） 該法的原理與免疫熒光法相似，不同之處在于用酶標記的抗體，稱酶標抗體。酶標抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當加入酶的底物時，底物在酶的催化下，發(fā)生組織化學反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)不需特殊儀器，在光學顯微鏡下即能觀察，目前常用的酶是HRP，底物為DAB，可棕褐色沉淀物，使玻片組織標本上的抗原所在部位呈現(xiàn)顏色。 大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒 ELISA測定時一般需經(jīng)過以下步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。ELISA操作較繁雜，操作不當將引起較大的誤差。在操作中應注意以下5個方面。
1．隨著病情的進展或由其他因素影響，某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動，因此有必要對標本進行預處理，例如對血清標本作適當稀釋，或離心分離血脂等。間接法測定中，標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2．加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3．在成批手工檢測中，還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應和酶促反應時間不*，對競爭法及定量檢測影響很大，不注意可能會導致錯誤結(jié)果或定量不準。
4．洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應物，終止抗原抗體反應，除去標本中與反應無關(guān)的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。
5．準確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀（酶標儀），比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反應液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應孔的吸光度值（A值）。酶標儀具有良好的重復性。
大鼠D-乳酸脫氫酶ELISA試劑盒 實驗原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗D-LDH抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗D-LDH抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-LDH呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。